GST/Halo-Pull down
檢測已經(jīng)蛋白質(zhì)之間的相互作用，鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白
真核表達系統(tǒng)，蛋白更接近體內(nèi)結(jié)構(gòu)
沒有細胞內(nèi)干擾因素的限制，表達成功率高
蛋白表達載體構(gòu)建成功后，不需要轉(zhuǎn)化和鑒定，可直接表達目的蛋白，節(jié)省時間
- 技術簡介
- 技術流程
- 結(jié)果示例
- 應用案例
蛋白Pull down技術將目標蛋白進行體外原核表達，使標簽蛋白（Halo、GST、His等）與目標蛋白融合表達，可以不受抗體、物種限制僅借助標簽的親和介質(zhì)將目標蛋白純化出來，目標蛋白在純化過程中可以將與其能夠發(fā)生作用的蛋白“下拉”下來，進而利用蛋膠、Western Blot或者質(zhì)譜鑒定拉下來的蛋白質(zhì)，這些蛋白即與目標蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down實驗還可以通過外源同時表達目標蛋白和待測蛋白，利用Pull down點對點的確定它們是否發(fā)生直接的相互作用，也可以僅表達蛋白質(zhì)的結(jié)合區(qū)域進行蛋白Pull down，確定兩個蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。
本公司主要提供Halo/GST-tag pull down：Halo-tag pull down是使用體外真核表達系統(tǒng)來表達目的蛋白，表達的目的蛋白攜帶Halo標簽；GST-tag pull down是使用大腸桿菌誘導表達目的蛋白，表達的目的蛋白攜帶GST標簽，也可以利用其它標簽蛋白進行pull down實驗。
Halo/FLAG-tag pull down技術優(yōu)勢：
真核表達系統(tǒng)，蛋白更接近體內(nèi)結(jié)構(gòu)
沒有細胞內(nèi)干擾因素的限制，表達成功率高
蛋白表達載體構(gòu)建成功后，不需要轉(zhuǎn)化和鑒定，可直接表達目的蛋白，節(jié)省時間
| 步驟 | 內(nèi)容 | 交付內(nèi)容 | 周期 |
| 載體構(gòu)建 |
| 測序結(jié)果 | 1-2周 |
| 無細胞表達+純化 |
| 表達評估報告 | 1周 |
| Pull Down |
| 銀染結(jié)果 | 1周 |
| 質(zhì)譜檢測 |
| 質(zhì)譜結(jié)果 | 2周 |
案例1
2023年12月，北京林業(yè)大學和藍景科信合作，在植物學主流學術期刊Plant Stress（IF=5.0）上，發(fā)表了題為“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。該研究借助HaloTag pull-down技術鑒定了胡楊CPK21的互作蛋白，為揭示胡楊CPK21調(diào)控植物Cd耐受的分子機制研究提供了技術支撐。
原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.stress.2023.100328
案例2
2025年8月，北京林業(yè)大學林木花卉遺傳育種教育部重點實驗室的研究團隊在《Environmental and Experimental Botany》發(fā)表一篇題為“PeCPK21 interacts with HMAPs to tolerate elevated cadmium stress in Populus × canescens”的研究論文。該研究借助HaloTag pull-down和質(zhì)譜分析，揭示了PeCPK21作為Cd2?信號傳感器，通過與HMAPs互作從多維度增強楊樹耐鎘性的分子機制，為林木耐鎘基因工程提供了重要靶點。
原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.envexpbot.2025.106216
