- 技術(shù)簡介
- 服務流程
- 應用案例
DNA Pull Down是一種新穎的DNA-蛋白互作技術(shù)，能夠鑒定與特定DNA序列結(jié)合的蛋白（轉(zhuǎn)錄因子或者DNA結(jié)合蛋白）。DNA Pull Down使用生物素標記的DNA探針作為誘餌，與提取的內(nèi)源細胞核蛋白進行孵育，捕獲與DNA探針特異性結(jié)合的蛋白（比如轉(zhuǎn)錄因子），最終使用蛋白質(zhì)譜的方法，鑒定出特異性結(jié)合的蛋白。
DNA Pull Down的優(yōu)勢在于，探針的設計長度范圍廣，蛋白保持天然結(jié)構(gòu)，實驗周期短，通量高，特異性強，假陽性率低，應用范圍廣（適用于原核生物與真核生物）。將DNA Pull Down與蛋白質(zhì)譜結(jié)合，又具備高靈敏度的特點。
技術(shù)優(yōu)勢
探針長度設計范圍廣
蛋白提取自新鮮組織和細胞，保持天然構(gòu)象
特異性強，假陽性率低
適用于真核生物和原核生物
實驗周期短，高通量，高靈敏度
技術(shù)應用
DNA pull-down主要用于篩選與目的DNA片段互作的蛋白（如轉(zhuǎn)錄因子等）。
| 服務流程 |
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| 客戶提供 | 樣本要求 |
新鮮樣本（組織或細胞）； 探針序列； 物種參考基因組信息； | 組織樣本：3g 細胞樣本：2.7ⅹ107 |
| 交付結(jié)果 | 項目周期-工作日 |
1. DNA探針電泳圖 2. 探針標記效率結(jié)果 3. 核蛋白銀染結(jié)果 4. DNA pull down銀染結(jié)果 5. 質(zhì)譜檢測結(jié)果 6. DNA Pull Down分析報告 | 探針制備：10天 核蛋白提取：2天 Pull down和銀染：3天 質(zhì)譜分析：20天 合計：35個工作日 |
2022年5月19日，揚州大學園藝與植物保護學院陶俊和趙大球教授團隊共同在Plant, Cell & Environment（IF=7.79）雜志上發(fā)表了題為“Herbaceous peony AP2/ERF transcription factor binds the promoter of the tryptophan decarboxylase gene to enhance high-temperature stress tolerance”的研究性論文。
PlTDC在P. lactiflora耐高溫脅迫中發(fā)揮了積極作用，并通過DNA pull-down技術(shù)鑒定了其表達受到AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子PlTOE3的激活，增強了褪黑激素的產(chǎn)生和高溫耐受性。這些結(jié)果為研究植物高溫脅迫的調(diào)控機制提供了新的思路。
原文鏈接：https://doi.org/10.1111/pce.14357
