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熒光素酶互補實驗(LCI)
熒光素酶互補實驗 (Luciferase Complementation Assay, LCI)具有高靈敏度、可定量化、操作簡單的優(yōu)勢,被廣泛應(yīng)用于植物學(xué)和動物學(xué)中驗證蛋白質(zhì)的相互作用研究。
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雙分子熒光互補技術(shù)(BiFC)
雙分子熒光互補(Bimo-lecular fluorescence complementation,簡稱BiFC)技術(shù),可以直觀、快速地判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的定位和相互作用。
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酵母雙雜交系統(tǒng)(Y2H)
酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeast two-hybrid system)是將待研究的兩種蛋白質(zhì)A和B的編碼DNA序列分別克隆(融合)到酵母表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子(如GAL4等)的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(B-BD)和轉(zhuǎn)錄激活域(A-AD)上,構(gòu)建成融合表達(dá)載體,從表達(dá)產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。
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GST/Halo-Pull down
Halo Pull Down技術(shù)是將Halo標(biāo)簽的融合蛋白固相化到磁珠上,與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行孵育,鑒定與之相互作用的蛋白。該方法可以鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鑒定兩個已知蛋白間是否存在相互作用。
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Co-IP/Co-IP-MS
免疫共沉淀(Co-IP)以抗體與抗原的特異性結(jié)合為基礎(chǔ),以檢測兩個已知蛋白之間的相互作用,或者尋找與已知蛋白相互作用的未知蛋白。免疫共沉淀的優(yōu)勢在于蛋白的結(jié)合是在細(xì)胞內(nèi)完成,能夠反應(yīng)天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)相互作用,結(jié)果更加真實可靠。
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