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技術(shù)服務(wù)
Technical service

畢赤酵母蛋白表達(dá)服務(wù)

具有生長速度快、成本相對(duì)較低、易操作等優(yōu)點(diǎn)

易于工業(yè)級(jí)別放大培養(yǎng)；同時(shí)具備真核細(xì)胞對(duì)蛋白的翻譯后修飾的加工能力

能夠獲得活性高的可溶性重組蛋白

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  • 技術(shù)簡介
  • 表達(dá)案例

畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是工業(yè)微生物中應(yīng)用較廣泛的系統(tǒng)，具有生長速度快、成本相對(duì)較低、易操作等優(yōu)點(diǎn)，易于工業(yè)級(jí)別放大培養(yǎng)；同時(shí)具備真核細(xì)胞對(duì)蛋白的翻譯后修飾的加工能力，能夠獲得活性高的可溶性重組蛋白。


步驟內(nèi)容交付內(nèi)容周期
密碼子優(yōu)化及基因合成

  • 客戶提供目的蛋白對(duì)應(yīng)的CDS序列信息或質(zhì)粒


1-2周
載體構(gòu)建

  • 克隆至合適的表達(dá)載體

  • 質(zhì)粒測(cè)序

  • 質(zhì)粒制備及線性化

  • 測(cè)序結(jié)果

  • 線性化檢測(cè)結(jié)果

1-2周
表達(dá)鑒定

  • 轉(zhuǎn)化

  • 陽性克隆子篩選（PCR法）

  • 高拷貝菌株篩選（可選）

  • 表達(dá)小試（5-10菌株）

  • 表達(dá)分析鑒定（WB）

  • 定株，優(yōu)化表達(dá)條件

  • 陽性表達(dá)菌株

  • PCR鑒定陽性菌株

  • 高拷貝陽性菌株（可選）

  • WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果

  • 小試表達(dá)總結(jié)

  • 轉(zhuǎn)化及鑒定1-2周

  • 高拷貝篩選2-3周（可選）

  • 表達(dá)小試及鑒定1-2周


純化及鑒定

  • 放大培養(yǎng)2-5升

  • 表達(dá)上清液濃縮

  • Ni柱低壓親和純化

  • PAGE分析純化過程

  • WB鑒定純化后蛋白

  • 蛋白純度鑒定報(bào)告

  • 成品蛋白

  • 放大培養(yǎng)2-3周

  • 蛋白純化1-2周

  • WB 1周



酵母表達(dá)案例-1.png

M：Molecular weight marker

All：All cell lysate

S：Supernatant of cell lysate

P：Precipitation of cell lysate

FT：Flow through

W1：Wash 1

W2：Wash 2

E：Elution from Ni-NTA


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